Wybrane Techniki Biologii Molekularnej.

Publikacja stanowi praktyczne wprowadzenie do wybranych technik stosowanych w biologii molekularnej. Obejmuje podstawowe zasady pracy w laboratorium, wyposażenie, technikę pipetowania oraz obliczanie stężeń roztworów, a następnie przedstawia metody analizy kwasów nukleinowych i białek. Omówiono m.in. pobieranie i przechowywanie materiału biologicznego, izolację genomowego DNA i całkowitego RNA, ilościową i jakościową analizę kwasów nukleinowych, elektroforezę, reakcję PCR i markery DNA, a także izolację białek, oznaczanie ich stężenia metodą Bradforda, SDS-PAGE oraz immunodetekcję metodą Western-blotting. Publikację uzupełniają materiały dodatkowe, objaśnienia skrótów i nazw potocznych oraz skorowidz rzeczowy.

Spis Treści

Wprowadzenie . . . . . . . . . . str. 5

I. INFORMACJE WSTĘPNE

1. Zasady bezpieczeństwa pracy w laboratorium biologii molekularnej . . . . . . . . . . str. 6

2. Podstawowe wyposażenie laboratorium biotechnologicznego . . . . . . . . . . str. 7

3. Technika pipetowania . . . . . . . . . . str. 11

4. Obliczanie stężeń roztworów . . . . . . . . . . str. 17
   4.1. Stężenie procentowe . . . . . . . . . . str. 17
   4.2. Stężenie molowe . . . . . . . . . . str. 19

II. ANALIZY KWASÓW NUKLEINOWYCH . . . . . . . . . . str. 23

1. Pobieranie i przechowywanie materiału biologicznego . . . . . . . . . . str. 23

2. Izolacja genomowego DNA z materiału roślinnego . . . . . . . . . . str. 23
   2.1. Izolacja genomowego DNA z wykorzystaniem buforu CTAB . . . . . . . . . . str. 24
   2.2. Izolacja genomowego DNA z wykorzystaniem metody fenolowo-chloroformowej . . . . . . . . . str. 27

3. Izolacja całkowitego RNA i zasady pracy z kwasami rybonukleinowymi . . . . . . . . . . str. 31

4. Ilościowa i jakościowa analiza kwasów nukleinowych . . . . . . . . . . str. 36

5. Metody rozdziału i wizualizacji kwasów nukleinowych . . . . . . . . . . str. 42
   5.1. Elektroforeza w żelu agarozowym . . . . . . . . . str. 43
   5.2. Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym . . . . . . . . . str. 48

6. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) . . . . . . . . . str. 52
   6.1. Rodzaje reakcji PCR . . . . . . . . . str. 56

7. Markery DNA . . . . . . . . . str. 60

III. ANALIZY BIAŁEK . . . . . . . . . . str. 64

1. Izolacja białek z materiału roślinnego . . . . . . . . . . str. 64

2. Oznaczanie stężenia białka w próbie za pomocą metody Bradforda . . . . . . . . . . str. 65

3. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących z SDS (SDS-PAGE) . . . . . . . . . . str. 68

4. Immunodetekcja białek za pomocą metody Western-blotting . . . . . . . . . . str. 76

Materiały uzupełniające . . . . . . . . . . str. 85
Objaśnienia skrótów i nazw potocznych używanych w biologii molekularnej . . . . . . . . . . str. 90
Skorowidz rzeczowy . . . . . . . . . . str. 95